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醫用一次性防護服輻照滅菌用生物指示菌 短小芽孢杆菌

文章來源:杭州葡萄社区app科技有限公司    時間:2020-02-20
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爲保障疫情防控期間緊急醫用一次性防護服的供给,国务院应对新型冠状病毒感染的肺炎疫情联防联控机制医疗物资保障组于2020年2月8日发出了“关于疫情期间执行《醫用一次性防護服輻照滅菌应急规范(临时)》的通知”,要求各地可采用辐照(钴60或电子加速器)方式对医用防护服进行灭菌。实施辐照时,按照産品生产厂家要求,在産品箱中布放快速检测生物指示物,辐照结束后,快速检测生物指示物为阴性结果时符合産品放行要求。那么什麽是生物指示物?輻照滅菌用的生物指示物應采用什麽菌種、又具有什麽特點呢?

生物指示物定义在不同标准和规范中不尽相同:《医疗保健産品灭菌 辐射 第1部分: 医疗器械灭菌过程的开发、确认和常规控制要求》(GB 18280.1-2015)中是指“包含对规定的灭菌过程有确定抗力的活微生物的测试系统”;《医疗卫生用品辐射灭菌消毒质量控制》(GB 16383-2014)中是指“对特定灭菌或消毒程序有确定的抗力,可供消毒灭菌效果监测使用的微生物检验器材。”《消毒技术规范》(2002年版)中是指“将适当载体染以一定量的特定微生物,用于指示消毒或灭菌效果的制品”。

從以上定義可以看出生物指示物的要素爲含有一定量的特定微生物,有確定抗力(以D值或D10值*表示),特定微生物的选择至关重要。依据《中国药典》(2015年版)、《消毒技术规范》和《一次性使用卫生用品卫生标准》(GB 15979-2002),电离辐射灭菌或消毒所采用的生物指示菌为短小芽孢杆菌Bacillus  pumilus E601(ATCC 27142)。

依据ATCC网站公开信息,短小芽孢杆菌E601主要用于电离辐射灭菌控制和无菌保证。1956年Pepper RE等人采用阴极射线对18株芽孢杆菌属Bacillus和7株梭菌属Clostridium的芽孢抗辐射性能进行了研究,结果表明短小芽孢杆菌E601具有比较强的抗性。该菌株具有以下生物学特性:

革蘭氏陽性,菌體呈杆狀,成對出現,大小0.6-0.7×2.0-3.0μm,可形成芽孢,芽孢圓柱形或橢圓形,膨大,中生或端生,見圖1。菌落白色或乳白色,圓形,表面濕潤,光滑,有半透明和不透明兩種形態,邊緣整齊,可起皺、邊緣不規則,見圖2。好氧生長,有運動性,最低生長溫度5~15°C,最高生長溫度40~50°C。生長pH範圍 6.0~9.5。10%NaCl條件下可以生長。過氧化氫酶陽性。

图1 短小芽孢杆菌B. pumilus显微形态** 图2 短小芽孢杆菌B. pumilus菌落形态**

电离辐射生物指示物采用短小芽孢杆菌B. pumilus芽孢制备而成。芽孢又稱內生孢子,是産芽孢細菌在營養缺乏條件下在胞內形成的圓形或橢圓形的休眠體,因含水量極低、抗逆性強,被廣泛用于高溫、紫外線、電離輻射等多種滅菌方法的監測用指示物。

研究显示,短小芽孢杆菌B. pumilus E601比蜡样芽孢杆菌B. cereus、枯草芽孢杆菌B. subtillu及生孢梭菌Clostridium sporogenes等菌种的芽孢具有更高的抗辐射性能,其芽孢浓度在106CFU/个时,随附着载体和介质不同,其D值在1.20~2.53kGy之间变化,采用滤纸片为载体、塑料袋包装时,其对钴-60照射的D值一般为1.7kGy,对电子直线加速器照射的 D值为1.85kGy,符合《消毒技术规范》和《一次性使用卫生用品卫生标准》(GB 15979-2002)中对电离辐射灭菌或消毒生物指示物要求。

在使用生物指示物进行消毒或灭菌效果监测时,依据《医疗卫生用品辐射灭菌消毒质量控制》(GB 16383-2014)要求,于最小劑量处,每次至少布放10片生物指示物,《消毒技术规范》要求每次测试至少选5箱,每箱産品布放3片生物指示物,将待检箱置最小劑量处。

滅菌結束後,取出指示物接種營養肉湯培養液作定性檢測或接種營養瓊脂培養基作定量檢測,同時將未處理的生物指示物作爲陽性對照相同接種,兩者均置35℃±2℃培養。陽性對照應在24h內有菌生長。定性培養樣品如連續觀察7d全部無菌生長,可報告生物指示物培養陰性,滅菌合格。定量培養樣品與陽性對照相比殺滅對數值***达到3.0也可报告灭菌合格。根据産品輻照滅菌的無菌保證水平(SAL选择生物指示物的定性或定量结果评价,如果産品SAL要求≤10-6,则应选择定性培养,如果産品SAL要求≤10-3,则应选择定量培养。

注:

* :D值或D10值:在規定條件下,殺滅90%微生物數量所需的時間(min)或劑量。

**:图1和图2摘自《Bergey's Manual of Systematic Bacteriology》 (第二版,第3卷)

***:殺滅對數值:当微生物数量以对数表示时,指消毒前后微生物减少的对数值。

相關標准法規及參考文獻:

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來源:中國工業微生物菌種保藏管理中心
聯系電話:010-53218311
E-mail:sunyuting@china-cicc.org


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